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一、 液體樣本:
1. 血清:PP管(不含熱原和內毒素)收集全血,室溫自然凝固20-30分鐘,或4℃過夜,分離出血清,(適當傾斜離心管以擴大液面的橫截面,使血清能更大程度分離出來)。4℃ 2000轉/分離心20-30分鐘,將血清和紅細胞迅速小心地分離,收集上清,立即進行測定。如暫不檢測可將收集的血清分裝保存于-20℃或-80℃,避免反復凍融,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。血清樣本應注意避免溶血和細菌污染。
2. 血漿:使用抗凝管或加入抗凝劑(EDTA、檸檬酸鈉或肝素)的PP管收集全血,混合10-20分鐘,4℃ 2000轉/分,離心20-30分鐘,收集上清,立即進行測定,如暫不檢測可將收集的血清分裝保存于-20℃或-80℃,避免反復凍融。樣本應避免溶血或高血脂。保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
3. 尿液、胸腹水、腦脊液、母乳、唾液:用無菌管收集樣本,4℃ 2000轉/分,離心20-30分鐘。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
4. 細胞培養(yǎng)上清:
1) 胞外:無菌管收集,4℃ 2000轉/分,離心20-30分鐘,除去細胞碎片和雜質,收集上清液備用,樣本保存在-20℃或-80℃,避免反復凍融,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
2) 胞內:加入裂解液,或用pH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液,使細胞濃度達到100萬/ml左右,通過反復凍融(如果反復凍融,破碎效果不好,可采用超聲波破碎),使細胞膜破壞并釋放出細胞內成分,2000轉/分,離心20-30分鐘,收集上清。
二、 固體樣本:
1. 組織標本:標本采集后用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。使用時切割標本,稱取1g左右組織,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。4℃ 2000轉/分,離心20分鐘,仔細收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
2. 植物標本:取0.1g新鮮植物組織樣本,液氮中充分研磨;加入樣品體積9倍的提取液(pH7.2-7.4左右的PBS),4℃ 8000轉/分離心30分鐘,取上清并暫時保存于4℃待用。如需精確提取,可在液氮研磨后加入1ml的提取液(80%甲醇), -20℃過夜后再4℃ 8000轉/分,離心1小時,取上清;上清液過C-18固相萃取柱,過柱后的樣本真空干燥或氮氣吹干,保存?zhèn)溆茫簧蠘忧凹尤?span lang="EN-US" style="box-sizing: border-box; font-family: "Segoe UI", "Microsoft Yahei" !important;">pH7.2-7.4左右的PBS緩沖液(1ml定容)?;靹蚝笫覝胤胖?span lang="EN-US" style="box-sizing: border-box; font-family: "Segoe UI", "Microsoft Yahei" !important;">30分鐘,4℃8000轉/分,離心15分鐘,取上清并暫時保存于4℃待用。
3. 土壤:稱取1g土壤,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,充分混勻。4℃ 2000轉/分,離心20分鐘,仔細收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。