人胰島素elisa試劑盒采用的是雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(ELISA)。測定樣品中人胰島素水平。向預先包被了抗人胰島素抗體的酶標孔中,加入標準品和樣本,溫育后,加入生物素標記的抗胰島素抗體。再與HRP標記的鏈霉親和素結合,形成免疫復合物,再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結合的酶,然后加入顯色底物TMB,產(chǎn)生藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。最后,在450nm處測定反應孔樣品吸光度(OD)值,樣本中的人胰島素濃度與OD值成正比,通過繪制標準曲線計算出樣本中人胰島素的濃度。
人胰島素elisa試劑盒的使用方法:
人胰島素elisa試劑盒樣品收集、處理及保存方法應用雙抗體夾心法測定標本水平。用純化抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入抗體,再與HRP標記的抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品濃度。
1、血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3、細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5、保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品:
1、酶標儀(450nm)
2、高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3、37℃恒溫箱