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簡要描述:HT115(DE3)感受態(tài)細(xì)胞HT115(DE3)菌株是一類特殊的RNase III缺陷型大腸桿菌菌株,可以飼喂線蟲,主要用于秀麗隱桿線蟲(C. elegans)的RNAi干擾試驗。該菌株可以在LB或2YT培養(yǎng)基中正常生長,Tn10轉(zhuǎn)座子的存在使其具有四環(huán)素抗性。
更新時間:2022-01-20
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
瀏覽次數(shù):1744
品牌 | 其他品牌 | 貨號 | BFNC86089 |
---|---|---|---|
規(guī)格 | 10x100ul/50x100ul | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 僅用于科研 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
HT115(DE3)感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86089-01(10×100ul)/BFNC86089-02(50×100ul)
HT115(DE3): 100μl/支
pUC19 (control vector,10pg/μl): 10μl
保存條件(保質(zhì)期): -80℃(6個月)
基因型
F- mcrA mcrB, IN(rrnD-rrnE)1 rnc14::Tn10(DE3 lavUV5::T7 polymerase)
產(chǎn)品說明
HT115(DE3)菌株是一類特殊的RNase III缺陷型大腸桿菌菌株,可以飼喂線蟲,主要用于秀麗隱桿線蟲(C. elegans)的RNAi干擾試驗。該菌株可以在LB或2YT培養(yǎng)基中正常生長,Tn10轉(zhuǎn)座子的存在使其具有四環(huán)素抗性。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū) (DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶,在IPTG存在時可誘導(dǎo)T7 RNA聚合酶大量表達,進而啟動線蟲ds RNA的表達),可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,除了用于線蟲RNAi干擾試驗,也可用于pET系列,pGEX,pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達。
青旗生物生產(chǎn)的HT115(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達0.5×108 cfu/μg DNA。
操作方法
1. HT115(DE3)感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的質(zhì)粒并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的LB無菌培養(yǎng)液,37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取50 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。
HT115(DE3)感受態(tài)細(xì)胞
IPTG配制:
Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)
by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.
注意事項
1. 感受態(tài)細(xì)胞盡量在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。
3. 誘導(dǎo)時,IPTG濃度可根據(jù)實驗選擇使用(0.1-10mM)。
4. 進行線蟲RNAi質(zhì)粒轉(zhuǎn)化時,抗生素使用濃度可參考:氨芐—50ug/ml,四環(huán)素—12.5ug/ml。
5. 若進行蛋白表達,為獲得需要量的蛋白,誘導(dǎo)時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。