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EPI400電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞

EPI400電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞

簡要描述:EPI400電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞只能用于電擊轉(zhuǎn)化,不能用于熱激轉(zhuǎn)化。該菌株來源于EC100菌株,將EC100核基因中控制質(zhì)??截悢?shù)的pcnB基因刪除后引入一個誘導啟動子驅(qū)動的pcnB基因,即是EPI400菌株。EPI400菌株可以降低質(zhì)粒的拷貝數(shù),特別適合于各種不穩(wěn)定DNA或毒性基因的克隆,在加入WDEPI-誘導劑 I 后又可以提高質(zhì)粒產(chǎn)量到正常狀態(tài)。

更新時間:2022-01-20

廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

瀏覽次數(shù):1366

詳情介紹
品牌其他品牌貨號BFNC86051
規(guī)格5x50ul/20x50ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途僅用于科研應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

EPI400電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞



產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86051-01(5×50ul)/BFNC86051-02(20×50ul)


EPI400 Electroporation-Competent Cell                50μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                                10μl

保存條件(保質(zhì)期):                                         -80℃(6個月)


基因型

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL (StrR) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr


產(chǎn)品說明

EPI400電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞只能用于電擊轉(zhuǎn)化,不能用于熱激轉(zhuǎn)化。該菌株來源于EC100菌株,將EC100核基因中控制質(zhì)??截悢?shù)的pcnB基因刪除后引入一個誘導啟動子驅(qū)動的pcnB基因,即是EPI400菌株。EPI400菌株可以降低質(zhì)粒的拷貝數(shù),特別適合于各種不穩(wěn)定DNA或毒性基因的克隆,在加入WDEPI-誘導劑 I 后又可以提高質(zhì)粒產(chǎn)量到正常狀態(tài)。[mcrA, Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型使EPI400菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA。recA1endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。lacZΔM15標記的存在使EPI400可用于藍白斑篩選,tonA賦予其抗噬菌體T1和T5的能力,rpsL賦予其鏈霉素抗性。

青旗生物生產(chǎn)的EPI400電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞適用于不穩(wěn)定DNA或毒性基因的克隆,經(jīng)特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>1010 cfu/μg DNA。


操作方法

1. 0.1cm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,待其瀝干水分,正置5分鐘,使乙醇充分揮發(fā),待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中,壓實冰面,電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5分鐘充分降溫。

2. -80℃保存的EPI400電擊感受態(tài)細胞插入冰中5 分鐘,待其融化,加入目的DNA (質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物)并用手bo打EP管底輕輕混勻,避免產(chǎn)生氣泡,立即插入冰中。

A. 測定轉(zhuǎn)化效率使用1 μl 10 pg/μl的對照質(zhì)粒 pUC19;

B. 對于連接產(chǎn)物,請用乙醇沉淀DNA后加入適量TE緩沖液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重懸,DNA濃度不超過100ng/μl,體積不超過5μl/50μl 感受態(tài)。

3. 200 μl槍頭將感受態(tài)-DNA混合物快速移到電擊杯中,避免產(chǎn)生氣泡,蓋上杯蓋。

4. 啟動電轉(zhuǎn)儀,設(shè)置參數(shù):C=25 μF,PC=200 Ω,V=1.8 kV (此為BioRad 電轉(zhuǎn)儀推薦參數(shù),也可按所用電轉(zhuǎn)儀推薦的參數(shù)操作),將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中,電擊完成快速插入冰中。

5. 2分鐘后從冰中取出電擊杯,放室溫,加入700 μl不含抗生素的無菌S.O.C. 培養(yǎng)基(室溫),用1ml槍吹吸電擊杯底部數(shù)次混勻后,轉(zhuǎn)移到50ml離心管(BD Falcon50ml錐形離心管等),向離心管中補加S.O.C. 培養(yǎng)基至5ml37℃,225 rpm復蘇60分鐘。

6. 5000rpm離心一分鐘收菌,重懸后取100-200 μl涂布到含相應(yīng)抗生素的S.O.C平板上(因菌量較大,若全部涂板請選用直徑15cm培養(yǎng)皿2-5個)。將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)13-17小時。


S.O.C 培養(yǎng)基配方

2% Tryptone

0.5% Yeast Extract

10 mM NaCl

2.5 mM KCl

10 mM MgCl2

10 mM MgSO4

20 mM glucose

PH-7.0

S.O.C. Medium is suitable for use in the final step of cell transformation to obtain maximal transformation efficiency of E. coli (Hanahan, 1983).


EPI400電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞


注意事項

1. 加入DNA時體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10

2. 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞加入電擊杯應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡,氣泡會增加弧光放電風險。

3. DNA不純或存在鹽,乙醇,蛋白及緩沖液等污染時,轉(zhuǎn)化效率急劇下降。

4. 電擊杯里的離子可增加溶液的電導,增大在含有細胞和DNA的溶液中產(chǎn)生電流和弧光放電的風險。

5. 若轉(zhuǎn)化大質(zhì)?;蛳氆@得較高轉(zhuǎn)化效率,推薦使用高純質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒。質(zhì)粒增大一倍,轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。

6. 對于連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化,盡量轉(zhuǎn)化前乙醇沉淀DNA后用適量TE緩沖液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重懸產(chǎn)物,保證DNA濃度不超過100 ng/μl。過高濃度連接產(chǎn)物或過大體積連接產(chǎn)物會降低轉(zhuǎn)化效率,增加弧光放電的風險。

7. 混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作,吸取感受態(tài)細胞時不可用孔徑過小的槍頭 (普通200ul槍頭應(yīng)剪去槍頭尖0.6cm) 避免用力過猛,以免剪切力過大損傷細胞膜,降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

8. 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞盡量保存在-80℃以下,高于-80℃超期儲存會導致轉(zhuǎn)化效率會下降。




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