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BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞

BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞

簡(jiǎn)要描述:BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞
BL21(DE3)pLysS菌株攜帶pLysS質(zhì)粒,具有氯霉素抗性。pLysS含有表達(dá)T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶可以作用于大腸桿菌細(xì)胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌,能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平,但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá),適合表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū)(DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶)。

更新時(shí)間:2022-01-20

廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

瀏覽次數(shù):687

詳情介紹
品牌其他品牌貨號(hào)BFNC86068
規(guī)格10x100ul/50x100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途僅用于科研應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞



產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86068-01(10×100ul)/BFNC86068-02(50×100ul)


BL21(DE3)pLysS:                                      100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質(zhì)期):                             -80℃(6個(gè)月)




基因型

F- ompT hsdS(rB-mB-) gal dcm(DE3)pLysS Camr


產(chǎn)品說(shuō)明

BL21(DE3)pLysS菌株攜帶pLysS質(zhì)粒,具有氯霉素抗性。pLysS含有表達(dá)T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶可以作用于大腸桿菌細(xì)胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌,能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平,但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá),適合表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū)(DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶)。青旗生物生產(chǎn)的BL21(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率高達(dá)108 cfu/μg DNA。


操作方法

1. BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)粒或連接產(chǎn)物)并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YTLB),混勻后37,200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含34 µg/ml氯霉素及所選質(zhì)粒篩選抗生素的2YTLB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。


BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞


IPTG

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by

dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

氯霉素

Chloramphenicol  34 mg/ml in ethanol. Store at -20. Use at 34 µg/ml.


注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞盡量在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。

4. 誘導(dǎo)時(shí),IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。

5. 為獲得需要量的蛋白,誘導(dǎo)時(shí)間,溫度,IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。

6. BL21(DE3)pLysS 菌株攜帶 pLysS質(zhì)粒,除復(fù)蘇培養(yǎng)基為無(wú)抗生素外,其余所用培養(yǎng)基、培養(yǎng)液均應(yīng)含有34 µg/ml氯霉素,以防質(zhì)粒丟失。




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