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BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

簡(jiǎn)要描述:BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞
非毒性蛋白的高水平表達(dá),可同時(shí)用于pET系列,pGEX,pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá);
電轉(zhuǎn)感受態(tài)效率達(dá)1×1010 cfu/μg DNA,可用于各種多肽,蛋白表達(dá)文庫的構(gòu)建

更新時(shí)間:2022-01-20

廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

瀏覽次數(shù):2898

詳情介紹
品牌其他品牌貨號(hào)BFNC86067
規(guī)格10x100ul/50x100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途僅用于科研應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞



產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86067-01(10×100ul)/BFNC86067-02(50×100ul)


BL21(DE3):                                               100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質(zhì)期):                             -80℃(6個(gè)月)




基因型


F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm(DE3)


產(chǎn)品說明

BL21(DE3)菌株用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體T7啟動(dòng)子的表達(dá)載體(如pET系列)的基因。λ噬菌體DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶,該區(qū)整合于BL21的染色體上,所以稱為BL21(DE3)。可同時(shí)表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,用于pET系列,pGEX,pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。

青旗生物生產(chǎn)的BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率達(dá)107cfu/μg DNA。


操作方法

1.BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物)并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2.42水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基(2YTLB),混勻后37200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YTLB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。


BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞


IPTG

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) bydissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.


注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞盡量在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過長(zhǎng),長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。

4. 誘導(dǎo)時(shí),IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。

5. 為獲得需要量的蛋白,誘導(dǎo)時(shí)間,溫度,IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。




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