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ArcticExpress (DE3) pRARE2感受態(tài)細(xì)胞

ArcticExpress (DE3) pRARE2感受態(tài)細(xì)胞

簡要描述:ArcticExpress (DE3) pRARE2感受態(tài)細(xì)胞
可以表達(dá)適應(yīng)低溫的伴侶蛋白Cpn10和Cpn60,降低包涵體的形成,增加可溶蛋白的表達(dá)量及生物活性。

更新時(shí)間:2022-01-20

廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

瀏覽次數(shù):1226

詳情介紹
品牌其他品牌貨號BFNC86091
規(guī)格10x100ul/50x100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途僅用于科研應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

ArcticExpress (DE3) pRARE2感受態(tài)細(xì)胞



產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86091-01(10×100ul)/BFNC86091-02(50×100ul)


ArcticExpress (DE3) pRARE2:                         100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                           10μl

保存條件(保質(zhì)期):                                   -80℃(6個(gè)月)



基因型


E. coli B F– ompT hsdS(rB– mB–) dcm+ TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR] pRARE2 (CamR)




產(chǎn)品說明


ArcticExpress (DE3) pRARE2來源于ArcticExpress (DE3),將具有氯霉素抗性的pRARE2質(zhì)粒導(dǎo)入ArcticExpress (DE3)細(xì)胞中即是ArcticExpress (DE3) pRARE2。ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株染色體DNA中整合了λ噬菌體DE3區(qū),使得ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株可同時(shí)表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,廣泛用于pET系列,pGEX,pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株具有四環(huán)素,慶大霉素,氯霉素抗性,endA1突變有利于質(zhì)粒DNA的穩(wěn)定。[cpn10cpn60 GentR]的存在使ArcticExpress (DE3) pRARE2可以表達(dá)適應(yīng)低溫的伴侶蛋白Cpn10和Cpn60(來自嗜冷菌—Oleispira antarctica)。Cpn10和Cpn60伴侶蛋白在4-12℃表現(xiàn)出較高活性,在ArcticExpress(DE3) pRARE2細(xì)胞中表達(dá)時(shí),可降低重組蛋白包涵體的形成,增加可溶重組蛋白的表達(dá)量及生物活性,比傳統(tǒng)的原核表達(dá)伴侶蛋白GroEL、GroES等具有更加優(yōu)異的促融能力。同時(shí),pRARE2質(zhì)??裳a(bǔ)充大腸桿菌缺乏的7種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)對應(yīng)的tRNA,提高外源基因的表達(dá)水平。

青旗生物生產(chǎn)的ArcticExpress (DE3) pRARE2感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達(dá)108cfu/μg DNA。


操作方法

1. ArcticExpress (DE3) pRARE2感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的質(zhì)粒,并用手bo打EP管底混勻,冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上((平板中務(wù)必同時(shí)含有34ug/ml的氯霉素,40ug/ml的慶大霉素和轉(zhuǎn)化質(zhì)粒本身的篩選抗生素;若質(zhì)粒濃度較高,也可稀釋后涂板,務(wù)必保證能在平板上挑到單克隆菌落)。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)


ArcticExpress (DE3) pRARE2感受態(tài)細(xì)胞


IPTG配制:

    Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)

    by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.





注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞盡量在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過長,長時(shí)間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2. ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株攜帶 pRARE2質(zhì)粒,除復(fù)蘇培養(yǎng)基為無抗生素外,其余所用培養(yǎng)基、培養(yǎng)液均應(yīng)含有34 µg/mllv霉素、40ug/ml的qing大霉素,以防質(zhì)粒丟失。

3. 為獲得需要量的蛋白,誘導(dǎo)時(shí)間,溫度,IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。

4. ArcticExpress (DE3) pRARE2感受態(tài)細(xì)胞具有四環(huán)素、慶大霉素、氯霉素抗性,不可用于具有四環(huán)素、慶大霉素、氯霉素抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。




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