驗收細(xì)胞注意事項

1、收到豬腎細(xì)胞；LLC-PK1細(xì)胞，請查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁，如有請盡快聯(lián)系。

2、收到豬腎細(xì)胞；LLC-PK1細(xì)胞，如包裝完好，請在顯微鏡下觀察細(xì)胞。,由于運輸過程中的問題，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時，請不要打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止 3-5 小時左右，讓細(xì)胞先穩(wěn)定下，再于顯微鏡下觀察，此時多數(shù)細(xì)胞會重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁，請用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，如臺盼藍(lán)染色證實細(xì)胞活力正常請按懸浮細(xì)胞的方法處理。

3、收到豬腎細(xì)胞；LLC-PK1細(xì)胞后，請鏡下觀察細(xì)胞，用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多，請離心收集細(xì)胞，接種到一個新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液，使用新鮮配制的培養(yǎng)基，使用進(jìn)口胎牛血清。剛接到細(xì)胞，若細(xì)胞不多時 血清濃度可以加到 15％去培養(yǎng)。若細(xì)胞迏到 80%左右 ，血清濃度還是在 10％。

4、收到豬腎細(xì)胞；LLC-PK1細(xì)胞時如無異常情況 ，請在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出，留下 5-10ML 培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)：超過 80%匯合度時，請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液，1000 轉(zhuǎn)/分鐘離心 3 分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。

5、將培養(yǎng)瓶置于 37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里，存放于 4℃冰箱，以備不時之需。

6、24 小時后，豬腎細(xì)胞；LLC-PK1細(xì)胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁，即可傳代。（貼壁細(xì)胞）將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去，加 3-5ml（以能覆蓋細(xì)胞生長面為準(zhǔn)）PBS 或 Hanks’液洗滌后棄去。加 0.5-1ml 0.25%含 EDTA 的胰酶消化，消化時間以具體細(xì)胞為準(zhǔn)，一般 1-3 分鐘，不超過 5 分鐘?？梢苑湃?7℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動瓶壁，見細(xì)胞脫落下來，加入 3-5ml 培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之*脫落，然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心，1000rpm/5min。棄上清，視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù)，一般一傳二，如細(xì)胞量多可一傳三，有些細(xì)胞不易傳得過稀，有些生長較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶，以具體細(xì)胞和經(jīng)驗為準(zhǔn)。（懸浮細(xì)胞）用移液管輕輕吹打瓶壁，直接將溶液吸入離心管離心即可。

7、貼壁細(xì)胞 ，懸浮細(xì)胞。嚴(yán)格無菌操作。換液時，換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液，37℃，5%CO2 培養(yǎng)。

特別提醒： 原瓶中培養(yǎng)基不宜繼續(xù)使用，請更換新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)。