XL2-Blue化學感受態(tài)細胞

產品規(guī)格CAT#: BFNC86010-01(10×100ul)/BFNC86010-02(50×100ul)

XL2-Blue:                                                       100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                       10μl

保存條件(保質期)：                               -80℃（6個月）

基因型

Tet^R Δ(mcrA)183 Hte [F? {proAB lacI^q lacZΔM15 Tn10 (Tet^R) Amy Cam^R}] Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1

產品說明

XL2-Blue菌株來源于XL1-Blue菌株，為Hte (high transformation efficiency)基因型，Hte是Stratagene開發(fā)的特異性提高感受態(tài)轉化效率及大質粒轉化能力的宿主菌基因型，已成功應用于40 kd質粒的構建。Hte使得XL2-Blue適用于大質粒DNA和重組產物的轉化，降低片段大小的偏愛性，多用于文庫構建。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質粒DNA的提取。hsdSMR突變導致EcoK核酸內切酶系統(tǒng)缺失，增強了外源DNA的穩(wěn)定性和提取質量。lacZΔM15的存在使XL2-Blue菌株可用于藍、白斑篩選。此菌株具有四環(huán)素和氯霉素抗性。

青旗生物生產的XL2-Blue感受態(tài)細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>10⁹ cfu/μg DNA。

XL2-Blue化學感受態(tài)細胞

操作方法

1. XL2-Blue感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質?；蜻B接產物) 并用手bo打EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少14 h。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞適宜在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質粒或連接產物時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少終用于涂板的菌量。