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BL21感受態(tài)細(xì)胞

BL21感受態(tài)細(xì)胞

簡要描述:BL21感受態(tài)細(xì)胞
非毒性蛋白的高水平表達(dá),不能用于由T7啟動子驅(qū)動的蛋白表達(dá)(如pET系列)

更新時間:2022-01-20

廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

瀏覽次數(shù):1064

詳情介紹
品牌其他品牌貨號BFNC86066
規(guī)格10x100ul/50x100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途僅用于科研應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

BL21感受態(tài)細(xì)胞


產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86066-01(10×100ul)/BFNC86066-02(50×100ul)


BL21:                                                         100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質(zhì)期):                             -80℃(6個月)




基因型

E. coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-) gal [malB+]K-12S)


產(chǎn)品說明

BL21是早開發(fā)的用于原核表達(dá)的菌株,BL21(DE3)、Rosetta、OrigamiB(DE3) 等一系列原核表達(dá)菌株均來源于BL21菌株。該菌株主要用于非毒性蛋白的表達(dá),不含T7 RNA聚合酶,所以不能用于由T7啟動子驅(qū)動的蛋白表達(dá)(如:pET系列);但含有大腸桿菌RNA聚合酶,可以用于tac或trc等使用大腸桿菌RNA聚合酶的原核系統(tǒng)的表達(dá)(如:pGEX,pMAL質(zhì)粒)。

青旗生物生產(chǎn)的BL21感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達(dá)107cfu/μg DNA。



BL21感受態(tài)細(xì)胞


操作方法

1. BL21感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)粒或連接產(chǎn)物)并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。


IPTG

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by

dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.


注意事項

1. 感受態(tài)細(xì)胞盡量在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。

4. 誘導(dǎo)時,IPTG濃度可選(0.1-2 mM均可)。

5. 為獲得需要量的蛋白,誘導(dǎo)時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。




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