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YM4271感受態(tài)細(xì)胞

YM4271感受態(tài)細(xì)胞

簡(jiǎn)要描述:YM4271感受態(tài)細(xì)胞
YM4271菌株,MATa型,可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒或與MATα型酵母菌株EGY48、Y187等通過(guò)mating操作進(jìn)行蛋白互作驗(yàn)證或篩庫(kù)試驗(yàn)。Transformation marker為:trp1,leu2,ura,報(bào)告基因?yàn)椋?HIS3。可用于酵母雙雜,酵母單雜或異源蛋白表達(dá)等試驗(yàn)。

更新時(shí)間:2022-01-20

廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

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詳情介紹
品牌其他品牌貨號(hào)BFNC86065
規(guī)格10x100ul/50x100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途僅用于科研應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

YM4271感受態(tài)細(xì)胞


產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86065-01(10×100ul)/BFNC86065-02(50×100ul)

YM4271 Competent Cell:                                        100μl/支            保存: -80℃(3個(gè)月)

pGADT7 (control vector, 10 ng/μl)                           10μl               保存:-80℃(12個(gè)月)

Carrier DNA (10 μg/μl)                                             100μl              保存:-20℃(12個(gè)月)

PEG/LiAC:                                                                    5ml              保存:    4℃(12個(gè)月)


基因型

MATa, ura3–52, his3-Δ200, ade2–101, ade5, lys2–801, leu2–3,112, trp1–901, tyr1–501, gal4Δ, gal80Δ, ade5::hisG



YM4271感受態(tài)細(xì)胞


產(chǎn)品說(shuō)明

YM4271菌株,MATa型,可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒或與MATα型酵母菌株EGY48、Y187等通過(guò)mating操作進(jìn)行蛋白互作驗(yàn)證或篩庫(kù)試驗(yàn)。Transformation marker為:trp1,leu2,ura,報(bào)告基因?yàn)椋?/span> HIS3。可用于酵母雙雜,酵母單雜或異源蛋白表達(dá)等試驗(yàn)。

青旗生物的YM4271感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,-80℃可保存三個(gè)月,pGADT7質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>104 cfu/μg DNA。






操作方法

1. 取100 µl冰上融化的YM4271感受態(tài)細(xì)胞,依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒2-5 µg,Carrier DNA (95-100℃,5 min,快速冰浴,重復(fù)一次) 10 µl,PEG/LiAc 500 µl并吸打幾次混勻,30℃水浴30 min (15 min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。

2. 將管放42℃水浴15 min (7.5 min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。

3. 5000 rpm離心 40 s棄上清,ddH2O 400 µl 重懸,離心 30s棄上清。

4. ddH2O 50 µl重懸,涂板,29℃培養(yǎng)48-96 h。




注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞盡量在冰上融化。

2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

3. 同時(shí)轉(zhuǎn)化2-3種質(zhì)粒時(shí)可增加質(zhì)粒的用量。

4. YM4271酵母菌株對(duì)高溫敏感,適生長(zhǎng)溫度為27-30℃;高于31℃,生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率呈指數(shù)下降。

5. 菌落變粉不是污染,是酵母細(xì)胞生長(zhǎng)中一個(gè)常見(jiàn)現(xiàn)象。當(dāng)細(xì)胞在平板培養(yǎng)幾天后,平板上的Adenine被酵母消耗完畢,酵母試圖通過(guò)自身代謝途徑合成Adenine以供利用,然而,有些菌株的ADE2基因被破壞,Adenine合成途徑受阻;又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常,所以造成中間產(chǎn)物P-ribosylamino imidazole (AIR) 在細(xì)胞中積累而使菌落變?yōu)榉奂t色。

6. 酵母在缺陷培養(yǎng)基中生長(zhǎng)速度比YPDA培養(yǎng)基慢,培養(yǎng)基中缺陷成分越多,生長(zhǎng)越慢,以轉(zhuǎn)化涂板為例:涂YPDA平板29℃,48 h培養(yǎng)可見(jiàn)直徑1 mm克?。煌縎D單缺平板29℃,48-60 h培養(yǎng)可見(jiàn)直徑1 mm克隆,涂SD雙缺平板29℃,60-80 h培養(yǎng)可見(jiàn)直徑1 mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90h培養(yǎng)可見(jiàn)直徑1 mm克隆。




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